逗点生物动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法ＨＬＢ

动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法（Copure^® HLB）

一、实验目的
本法为以Copure ^® HLB(60mg/3mL)柱开发的针对动物源食品(禽肉、畜肉和水产品)中氯霉素样本前处理净化方法，HPLC法作为检测手段。Copure ^®  HLB(60mg/3mL)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物
氯霉素(CAS:56-75-7)

三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(禽肉、畜肉和水产品)中残留药物的检测。

四、参考标准
《农业部1025号公告-21-2008 动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法》。

五、实验材料
Biocomma® Copure®HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)；W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。

六、实验方法
1、样品提取
取5±0.05 g猪肉样品，于50 mL离心管中，加入20  mL乙酸乙酯混合2 min，4000  r/min离心15 min，取上清液于另一离心管中，再用20 mL乙酸乙酯重复提取残渣1次，合并两次提取液，并加入500  μL氨水，于45 ℃旋转蒸发近干，加入500  μL甲醇混合1 min，加入10 mL4%NaCl涡旋混匀10 s，加入10 mL正己烷摇匀20次，4000r/min离心5 min，弃去上层，再用10 mL正己烷脱脂一次，加入500 μL氨水混匀供上柱净化用。

2、SPE柱净化
(1)活化：依次用2 mL甲醇、2 mL水活化。
(2)上样和洗脱：取上述备用液重力作用下过柱依次用2 mL水、1 mL甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/v)淋洗上样柱并抽干，用2 mL 5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
(3)重新溶解：收集洗脱液，于45 ℃氮气吹干，准确加入1.0 mL 甲醇/水(4:6, v/v)溶液溶解残余物混匀，0.22 µm滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

3、HPLC条件
设备：Waters Alliance 2690
检测器：Waters 2487 双波长检测器；检测波长：278nm
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6 mm，5µm)
流动相：A: 水    B: 甲醇
洗脱方式：等度洗脱，甲醇:水=40:60(v/v)
流速：1.0 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：20µL

七、实验结果
1、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果
表1  添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果

表2  W品牌同型号柱，添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)的添加回收结果

2、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)检测色谱图
图1  添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(CAP)检测色谱图