逗点生物动物性食品中地美硝唑检测的固相萃取方法

动物性食品中地美硝唑检测的固相萃取方法

（Copure^® MCX）

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测酸奶中地美硝唑含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

地美硝唑 (CAS: 991-92-8)。

三、应用范围

本方法适用于动物性食品中地美硝唑残留的检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《农业部1025号公告-2-2008动物性食品中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留检测液相色谱－串联质谱法》

五、实验材料

biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360)。

六、实验步骤

1、样品提取

准确称取酸奶2g于50mL离心管中加入15mL乙酸乙酯，漩涡摇匀2min，4000 r/min离心5min，取上清液；重复提取一次，合并清液；40℃水浴旋蒸至近干。

鸡心瓶加0.1mol/L盐酸3mL，涡动1min，充分溶解转移至15mL离心管中；向鸡心瓶加3mL正己烷，手摇一分钟，转移至同一离心管中；手摇离心管20次，4000r/min离心5min，弃去正己烷层。再加0.1mol/L 盐酸3 mL，涡动1min，合并两次盐酸溶液，加3mL正己烷重复除脂一次，除尽正己烷层，备用。

2、SPE柱净化

(1)活化：MCX柱使用前依次用3mL甲醇活化、3 mL 0.1 mol/L 盐酸平衡。

(2)上样和洗脱:在biocommaCopure MCX固相萃取柱上加入盐酸提取备用液，弃去流出液；依次用2 mL

0.1 mol/L 盐酸、2mL甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用甲醇-10%氨水溶液（6：4，v/v）6mL洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min）。

(3)重新溶解：洗脱液于40℃氮吹至1mL以下，水定容至1mL，过0.22μm滤膜，供HPLC上样测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)

检测器：Waters 2487 紫外检测器

流速：1.0 mL/min

检测波长：319 nm

进样体积: 20 μL

流动相：A：乙腈B：水

洗脱方式：梯度洗脱

表1:梯度洗脱条件

七、实验结果

1、1mg/kg酸奶中地美硝唑的添加回收结果

表1 1 mg/kg酸奶中地美硝唑的添加回收结果

2、添加水平为1mg/kg酸奶中地美硝唑的液相色谱图

图1添加水平为1mg/kg酸奶中地美硝唑的液相色谱图