（Copure ® 聚酰胺小柱）
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测饮料中合成着色剂的含量。该方 法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
柠檬黄(CAS:1934-21-0)，日落黄(CAS:2783-94-0)，胭脂红(CAS:569-64-2)，亮蓝(CAS:3844-45- 9)。
三、应用范围
本方法适用于饮料中多种合成着色剂的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma ®Copure ®聚酰胺小柱500mg/3mL(Cat. No. COPACR36)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确称取混有果肉的饮料5.0 g于15 mL离心管中，超声波振荡提取5 min， 涡旋1 min，4000 r/min离心5 min，上清液转移至15 mL离心管中，用水定容至5 mL。
2、SPE柱活化
(1) 活化：聚酰胺小柱使用前用2 mL甲醇、2 mL水活化 。
(2) 上样和洗脱：在聚酰胺小柱上加入5 mL待净化样品，然后用2 mL水、2 mL甲醇-甲酸（7:3,v/v）淋洗。然
后用5 mL 5%氨化甲醇进行洗脱，控制流速1 mL/min，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于40℃氮吹至干，加1 mL水定容，混匀，过0.45 μm滤膜，待上机测试。
3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5 μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
流动相：A：甲醇 B：0.02mol/L乙酸铵缓冲溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
检测波长：509 nm
进样体积：20 μL
六、实验结果
1、5 mg/kg饮料中4种合成着色剂的添加回收结果
表2 5 mg/kg饮料中4中合成着色剂的添加回收结果
2、添加水平为5 mg/kg饮料中4种合成着色剂检测的液相色谱图
图1 添加水平为5 mg/kg饮料中4种合成着色剂检测的液相色谱图
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