【微生物检测】浅谈微生物盲样心得！

作者：张珍

毕业一年，从事微生物检测也有一年之余，记得刚毕业来到公司的时候，领导问我想要干哪个，我说都行，因为在学校学的都是书本知识，动手操作能力较差，所以，当时觉得干那个都得从头学。就这样，我被安排到了微生物组，从此与微生物就有了不解之缘。

八月底我们接到一个沙门氏菌盲样，需要我们检验确定是不是沙门氏菌，由于那个时候没有经验，所以一直跟在师傅身后，我们先将盲样接种到营养肉汤以保存菌，然后按照标准划线接种于BS，HE和沙门氏菌显色培养基上，同时接种到TTB和SC进行后增菌，当时我们按照标准，一直等培养时间到了，才看平板上长的菌落形态是不是可疑菌落，若可疑，再做生化鉴定和血清学鉴定，同时我们用API20E做生化，查编码。将TTB和SC继续划平板 观察菌落形态，做法同上。

不久，公司进行地址变更，我们又接到一个大肠菌群计数盲样，我们按照作业指导书将冻干粉溶解，然后逐层进行稀释，做稀释度，当时我们是一个人做的，然后每个稀释度和平时一样，只做了两个平板，做了七八个稀释度，可是当结果出来的时候，同一稀释度不平行，不同稀释度之间也不成正比，我们只得硬着头皮往下接BGLB ，还好最后结果对上了，可我却在不停反思为什么会这样。

就这样，我们接下来的几次认证我一直按照师傅说的，老老实实按照标准做，可是，由于认证专家来的时间紧 ，每次我都发现时间不够，而且每次我们匆匆忙忙的做，但是结果都不是很确定，我一直在思考我们要怎样在有限的时间内把盲样做出来，而且把握能大一点。慢慢的，我的心里有了一点构思，但是还没有实践。

刚好，公司进行扩项，专家老师给了我们一管单核细胞增生李斯特氏菌盲样斜面，这次，我打算将自己的构思运用到实践中，和以前一样，我们先将盲样接种到营养肉汤进行保存，然后划线接种于李斯特显色培养基和PALCAM培养基，同时在其他可能致病菌平板上也划（BS，HE，BP，EMB等），这时候，我并没有和以前一样，傻傻的在等平板上长出菌落，而是做革兰氏染色镜检，发现为革兰氏阳性杆菌，直接把革兰氏阴性菌排除在外，同时做李斯特特有的生化现象（SIM动力试验，过氧化氢酶试验，溶血时间及用单核李斯特生化试剂盒做生化）。通过生化我们发现SIM有动力，过氧化氢酶阳性，但溶血为宽的、轮廓清晰的β-溶血，同时生化，鼠李糖阴性，木糖阳性，发现与单核细胞增生李斯特氏菌生化不符，与伊氏李斯特氏菌相符。待平板上立即长出可疑菌落后，不用等到培养时间，立即上述生化，发现与上述现象相符，最后，我们就很肯定的报是伊氏李斯特氏菌不是单核细胞增生李斯特氏菌，结果正确。

我相信，许多人和我一样，刚开始做盲样的时候，紧张，不知所错，总觉得时间不够用，所以，我们要善于发现，善于总结，微生物是一个知识积累的过程。

通过前面大大小小多次的盲样认证，我自己总结了一点经验。

如果是像大肠菌群冻干粉类计数的，首先，需要两组或三组人做对比，要使一个人出了问题，可以看其他人的，然后，多做几个稀释度（我们一般做六到八个），每个稀释度多做几个平板。

如果是斜面混合菌种：

①先将盲样接种到营养肉汤培养，后期如果有问题可以用来做。

②划线接种于特定平板，也可以多划几种，有后增菌的可同时进行后增菌，然后划平板。

③做革兰氏染色将菌划分为两大类（革兰氏阳性或阴性，球菌、杆菌或弧菌等），心里有初步判定。

④做特有的生化反应（氧化酶、溶血、动力试验等）。

⑤用生化试剂鉴定盒再次确认，有些可同时用API20E做。

⑥待平板上长出菌落，立即重复上述生化，再次确认上述结果。

注：API20E可用于鉴定肠杆菌科 和其他革兰氏阴性杆菌。

    平板上长出菌落立即做生化，不用等到培养时间，节约时间。

以上就是我自己总结的一些经验，希望可以带给大家一丝启发，同时可能也有许多说的不正确的地方，希望大家可以指出。