血球计数板的使用，常做镜检计数的你不得不看~~

 

    简介

 

    血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特质玻片制成，玻片中部有四条下凹的槽，将玻片分为三个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。常见的血球计数板的计数室有两种规格，一种是25×16型，称为希里格式血球计数板，此计数板分25个中方格，每个中格分16个小方格；一种是16×25型，称为麦氏血球计数板，此血球计数板分16个中方格，每个中格分25个小方格，这两种规格的共同点是均有400个小方格组成。计数室的长宽均为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3。用血球计数板计数时，先测定每个小方格（或中方格）的微生物量，再换算成每mL菌液（或每g样品）中微生物细胞的数量。由于血球计数板比较厚，不能使用油镜观察，因此不适合观察较小的细菌。

 

    操作步骤

 

    1.先在显微镜下检查计数板的计数室，看有无杂质或菌体，若不净则用沾有95%酒精的脱脂棉轻轻擦洗，再用蒸馏水冲净，最后用滤纸吸干水分后用擦镜纸擦净。

 

    2.用无菌水稀释菌液，直至菌液稀释到每小格的菌数可数，大约每格60-100个细菌。

 

    3.用滴管吸取少许摇匀的菌液，从计数板的中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），菌液利用毛细管作用沿两玻片间自行渗入计数室，切勿有气泡产生，并用吸水纸吸取沟槽内多余的菌液。也可在计数区直接滴加菌液，然后盖上盖玻片，利用毛细作用让菌液充满计数区，避免有气泡产生。

 

    4.静置5min左右，先在低倍物镜下找到计数室的位置，再转换到高倍镜下计数。

 

    5.计数时用25中格计数板，按对角线方位，取计数室四个角和中央5个中格（即80个小格）的菌数；计数板是16中格的计数板，按对角线方位，取四个角的四个中格（即100个小格）的菌数。观察计数时，要不断的调节显微镜的微调螺旋，在不同的焦距下看到计数室内不同空间位置的菌体，避免遗漏。对于中格线上的菌体，计数时定好规则，如数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。重复计数2-3次（数值相差不应过大，否则要重新计数），取几次的平均值，按公式计算出每mL菌液所含菌量。

 

    每mL菌液的含菌数=每小格菌的数量×400×10000×稀释倍数

 

    25×16规格的计数板：

 

    菌数/mL=80个小格中菌数/80×400×10000×稀释倍数

 

    16×25规格的计数板：

 

    菌数/mL=100个小格中菌数/100×400×10000×稀释倍数

 

    6.用后的血球计数板要用水流柱清洗干净，不要用刷子等刷洗，避免损坏网格刻度。洗净后自然晾干或用滤纸吸干水后再用擦镜纸擦干净。对于有致病性的菌，要先在5%石碳酸溶液中消毒后，再清洗干净。

 

    当然，血球计数板的缺点也是很明显的，首先是食品颗粒与细胞不易区分，活性细胞和非活性细胞都被计数，因此计数结果比平板计数法要高，部分微生物细胞不易分散均匀，有一些细胞可能没被计数，另外长时间操作计数也容易引起眼部疲劳。