细胞房支原体污染解决方案.

支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的的原核细胞微生物，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。革兰染色为阴性，但不易着色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。支原体在自然界分布广泛，无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器。 

大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，适合于偏碱条件下生存（pH7.6—8.0），对酸耐受性差，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。对热比较敏感在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。

细胞培养过程中的支原体污染是一个世界性难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。 

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染，等等。 

支原体污染的严重性

（1）细胞外形可以没有明显的变化，支原体可以与细胞共存，污染后细胞液不会死亡，培养基一般不发生浑浊；

（2）使用被支原体污染的细胞做实验会严重影响实验的结果，因为支原体会抑制细胞生长；导致染色体畸变；细胞膜抗原性改变；细胞复苏后存活率降低等。

（3）影响细胞的代谢和功能：培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；支原体活动使培液成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢。

（4）培养过程中细胞破碎较多，培养基pH变化明显，需要频繁更换新鲜培养基；

（5）细胞被支原体污染后会形成共生体系导致污染不断扩大。 

组织细胞培养工作中，可以从以下几方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基冲加入适量的抗生素。

抗生素主要用于消毒培养液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不严重时的“急救”方法。不同抗生素杀灭微生物不同，应根据需要选择。 

根据相关的实验室的管理经验，支原体污染的预防更为重要。有必要做好细胞房环境空间消毒。

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