培养的细胞出现空泡化是什么原因？

关键词：细胞培养 细胞污染 细胞空泡化 

将获得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再参加培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以必定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接参加培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入成长状态。 

细胞空泡化是什么

变性细胞的胞质、胞核内出现大小不一的空泡(水泡)，细胞呈蜂窝状或网状的现象。变性严重者，小水泡相互融合成大水泡，细胞核悬于中央，或被挤于一侧，细胞形体显著肿大，胞质空白，外形如气球状。

胞质空泡化可以是可逆的，也可以是不可逆的。可逆的胞质空泡化通常只是在暴露于诱导剂后能观察到，这种胞质空泡化可以引起细胞状态的改变或者细胞周期停滞。而不可逆的胞质空泡化会导致细胞死亡，许多自然或者人工合成的化合物以及被细菌或者病毒感染后均会出现不可逆的胞质空泡化，因此出现这种情况，细胞便不可再用于后续的实验中。 

出现细胞空泡化的原因

1）细胞老化

原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况，是有些细胞处于终末分化状态，不会再分裂，时间长了就会空泡化而死亡。

2）PH值

培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大。

3）胰酶消化

胰酶消化时间过长，会导致细胞状态受损，有时也会出现这种情况。除此之外，如果消化细胞吹打时力度过大，产生太多气泡，长期存在也会出现这种现象。 

4）自噬

细胞缺乏营养导致饥饿诱导形成自噬也会形成空泡化，但是这种空泡在光学显微镜下是看不到的，只有在电镜下才能观察到。

5）细胞代谢

在细胞培养过程中，由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题，内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。

6）污染

衣原体感染：一旦一些细胞出现空泡化，继续培养，空泡范围会扩大，即使传代后也如此，出现这种情况，细胞基本无法挽救。后来检测发现，此种细胞存在支/衣原体的感染。 

细胞空泡化我们应该如何解决？

1）如果是因为细胞老化的原因，可以通过复苏代数靠前的细胞进行培养。

2）如果是培养液PH的问题，可以通过更换培养液调整到合适的PH值，再进行培养。

3）在传代时，要选用合适浓度的胰酶和选取适当的消化时间进行消化，在操作时避免吹打太过用力出现太多气泡。

4）要保证细胞培养所需的营养充足，可以通过增加血清浓度和在培养基中加入谷氨酰氨解决。

5）尽量使用质量好和渠道正规的胎牛血清，因为这样的血清营养丰富且外源刺激因子少，可以有效的避免出现这类问题。

6）在细胞培养时要严格进行无菌操作，操作时要规范，减少污染的可能性。可以通过试剂盒检测细胞是否污染，对于已经污染的细胞灭菌后直接处理，避免污染其他细胞。

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