影响培养基pH的因素

在市场上购买的商品化脱水培养基，大多数厂家已经调整了pH到正确范围内，只需加水溶解后灭菌即可使用，有些培养基因成分原因或受其他因素的影响，导致灭菌后的pH不在范围内，需要进行调整。

培养基pH的规定：

  培养基灭菌前后通常会有变化，大多数培养基以灭菌后的pH为准，《GB4789.28 培养基和试剂的质量要求》中规定，“除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。”

影响培养基pH的因素：

  1.灭菌温度和时间

  市场上售卖的高压蒸汽灭菌锅性能存在差异，灭菌锅整个灭菌过程的持续时间会导致培养基pH的变化不同。特别是对于一些含糖量较高又不含缓冲体系的培养基（如沙氏葡萄糖琼脂、硫乙醇酸盐流体培养基、MRS培养基等）影响更大，一些小型的灭菌锅灭菌较快，培养基中的成分变化较小，灭菌后的培养基pH相对比较稳定，而一些大型灭菌锅或灭菌柜则不相同，整个灭菌过程持续时间比较长，而且受装载量、内部物品分布等因素影响，灭菌后的培养基通常pH会偏低（主要是因为培养基中的糖类成分在高温下会出现焦化现象，温度越高，高温持续时间越久，焦化现象越明显，直观上表现为培养基的pH下降和颜色加深）。因此，在使用大型灭菌锅制备大量培养基时，应预先进行灭菌工艺验证，若灭菌后的pH不正确，可在灭菌前进行调整。

  2.培养基的保温时间

  一些琼脂培养，灭菌后可能不会立即使用，许多人会选择放50℃左右水浴保温，也有些人会选择直接焖在灭菌锅里保温。水浴保温相对影响较小，而灭菌锅的温度相对较高，保温过程易造成培养基内的糖类焦化，导致培养基pH下降。因此，灭完菌的培养基应及时从灭菌锅取出，在50℃左右保温一般不超过4h，可继续使用。

  3.培养基的反复溶化

  已凝固的培养基，再次融化时需要加热处理，相当于增加了培养基的受热时间，复溶次数越多，培养基pH变化越大，同时也会导致琼脂的凝胶强度下降。因此，已凝固的培养基通常只允许复溶一次使用。

  4.培养基的溶解过程

  大多数厂家的培养基标签上都写着灭菌前需进行加热溶解，加热后再进行灭菌的培养基溶解比较均匀，而且有利于灭菌过程中的热穿透，若灭菌前未进行加热灭菌，易导致培养基pH变化不稳，特别是含琼脂的培养基，灭菌前不加热易导致培养基分布不均匀，灭菌不彻底。含碳酸盐的培养基，灭菌前不加热易导致灭菌后的培养基pH偏低。

  5.水质问题

  若配制培养基使用的水质不佳，偏酸或偏碱，或含有一些离子，都有可能会导致培养基的pH出现偏差。

  6.添加成分的影响

  有些培养基在灭菌后需添加一些营养成分增强营养或增加选择性，一些添加剂会对培养基的pH造成较大影响，如L-半胱氨酸盐酸盐酸性较强，加入培养基后会导致pH下降，因此应预先对培养基的pH进行调整，确保加入特定成分后的培养基pH依然在合格范围内。

  7.测量温度

  在标准中规定测定培养基的pH应以25℃为准，大多数没有缓冲体系的营养类培养基pH随着温度降低而升高，测量温度不对时会导测量的pH出现偏差，有些pH计虽然有温度补偿功能，但是这个模式并不能完全适用于培养基的测定，因此必须要在25℃时测定培养基的pH。

  8.pH计的准确度

  受缓冲液的配制、校准过程等各种因素影响，pH计的准确度也会存在误差，这种误差是不可避免的，大多数pH计的厂家认为误差范围应控制在±0.05以内。

培养基pH的调整：

  通常可使用1mol/L的盐酸和氢氧化钠进行调整，也可使用碳酸钠、酒石酸或苹果酸等弱碱弱酸进行调整，有些特殊的培养基，如培养军团菌用的BCYE、GVPC培养基，因钠离子对军团菌生长不利，需要用氢氧化钾进行调整pH。

GB 4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求 -标准下载

http://www.hopebiol.com/biaozhun-download.asp?id=21

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。