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液相色谱图谱出问题,这样解决更有效!

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-05-29  来源:食品实验室服务  浏览次数:42
核心提示:液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而有些问题必须通过修改操作程序来解决。本文汇总了一些关于液相色谱图谱问题的解决办法,这些办法也许能更有效的帮你解决问题。
 
ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">1
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">峰拖尾   

原因和解决方法
1、筛板阻塞
a、反冲色谱柱 

b、更换进口筛板 

c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷
填充色谱柱

3、干扰峰
a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误
调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱

 

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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">峰前延


原因和解决方法

1、柱温低
升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当
使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载
降低样品含量

4、色谱柱损坏
更换色谱柱


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">3
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">峰分叉


原因和解决方法

1、 保护柱或分析柱污染
取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相
改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">4
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">峰变形


原因和解决方法

1、样品过载
减少样品载量


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">5
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">早出的峰变形


原因和解决方法

1、样品溶剂选择不恰当
a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">6
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">早出峰拖尾程度大于晚出峰


原因和解决方法

1、柱外效应
a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
b、使用小体积的流通池


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">7
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">K’增加时,脱尾更严重


原因和解决方法

1、二级保留效应,反相模式
a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d、更换一支柱子 


2、二级保留效应,正相模式
a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入水(或多官能团化合物)
d、试用另一种方法

3、二级保留效应,离子对
加入三乙胺(或碱性样品)


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">8
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">酸性或碱性化合物的峰拖尾


原因和解决方法

1、缓冲不合适
a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

 

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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">额外的峰


原因和解决方法

1、样品中有其他组份

2、前一次进样的洗脱峰
a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速


3、空位或鬼峰
a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积


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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">保留时间波动


原因和解决方法

1、温控不当
调好柱温

2、流动相组分变化
防止变化(蒸发、反应等)

3、色谱柱没有平衡
在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱


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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">保留时间不断变化


原因和解决方法

1、流速变化
重新设定流速

2、泵中有气泡
从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当
a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相


ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">12
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">基线漂移


原因和解决方法

1、柱温波动
控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器

2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)
使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)
取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化
更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时
用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂,但检测器未调整。
重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
将波长调整至最大吸收波长处

ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">13
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">基线噪音(规则的)


原因和解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气
流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液
检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。

3、流动相混合不完全
用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)
减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备
断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。

6、泵振动
在系统中加入脉冲阻尼器

ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">14
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">基线噪音


原因和解决方法

1、 漏液
检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶
选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题
断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。

5、系统内有气泡
用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡
清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)
用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

8、检测器灯能量不足
更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞
更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置

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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">宽峰


原因和解决方法

1、流动相组成变化
重新制备新的流动相

2、流动相流速太低
调节流速

3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)
检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确
调整设定

5、柱外效应影响
a、柱子过载
b、检测器对反应时间或池体积响应过大
c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大
d、记录仪响应时间太长

6、缓冲液浓度太低
增加浓度

7、保护柱污染或失效
更换保护柱

8、色谱柱污染或失效,塔板数较低
更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷
打开柱入口,填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低
提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大
使用较小的时间常数

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ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">分离度降低


原因和解决方法

1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)
重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞
去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。

ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">17
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">所有的峰面积都太小


原因和解决方法

1、检测器衰减设定过高
减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大
设定较小的时间常数

3、进样量太少
增大进样量

4、记录仪连接不当
使用正确的连接

ntnet="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; float: left; width: 40px; height: 40px; text-align: center; color: rgb(255, 255, 255); font-size: 24px; line-height: 40px; background-color: rgb(13, 12, 12);">18
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px 15px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; width: auto; display: inline-block; float: left; height: 40px; font-size: 18px; line-height: 35px; border-bottom-width: 2px; border-bottom-style: solid; border-bottom-color: rgb(13, 12, 12); border-top-width: 2px; border-top-style: solid; border-top-color: rgb(13, 12, 12);">所有的峰面积都太大


原因和解决方法

1、检测器衰减设定过低
采取较大的衰减

2、进样过多
减少进样量

3、记录仪连接不正确
正确连接记录仪

 

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