血清中β-受体激动剂检测的固相萃取方法
(Copure® HLB)
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为分析方法,检测血清中β受体激动剂含量。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。
二、实验目标物
沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、班布特罗(CAS:81732-65-2)、克伦特罗(CAS:129138-58-5)、莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、应用范围
本方法适用于血清中β-受体激动剂的检测的HPLC检测及确证。
四、实验材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COHLB360)。
五、实验步骤
1、样品提取
准确移取样品1.0mL血清样品,备用。
2、SPE柱净化
(1)活化:HLB固相萃取柱使用前用1mL甲醇、1mL水活化。
(2)上样和洗脱:在HLB固相萃取柱上加入1mL血清样品,弃去流出液;用1 mL 5%甲醇水溶液(v/v)、淋洗,弃去淋洗液;抽干小柱;用2mL甲醇溶液洗脱,收集洗脱液(整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min)。
(3)重新溶解:50℃缓慢氮气流条件下吹至近干,用1 mL 甲醇溶解。经0.22μm滤膜重新过滤,供高效液相色
谱测定。
3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
检测器:Waters 2475 荧光检测器
检测波长:激发波长:206 nm
发射波长: 226 nm
流动相:A:乙腈B: 0.1%甲酸水
表1:梯度洗脱条件
流速:1.0 mL/min
进样体积:20μL
六、实验结果
1、1mg/kg血清中β-受体激动剂的添加回收结果
表1 1 mg/kg血清中β-受体激动剂的添加回收结果
2、添加水平为1mg/kg血清中β-受体激动剂检测的液相色谱图
图1添加水平为1mg/kg血清中β-受体激动剂检测的液相色谱图