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动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留检测的固相萃取方法 HLB

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-05-23  来源:逗点生物  作者:逗点生物  浏览次数:103
核心提示:逗点生物Copure固相萃取柱已广泛应用于基因检测、新药研发、临床诊断、食品安全、环境保护、工业品检测和生命科学等领域。在逗点生物的实验室将为您贡献更多的SPE应用。

动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留检测的固相萃取方法

(Copure® HLB)


一、实验目的
本法为以Copure®  HLB(60mg/3mL)柱开发的针对动物源食品(猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品)中硝基呋喃类代谢物残留检测的样本前处理净化方法,HPLC法作为检测手段。Copure® HLB(60mg/3mL)柱净化效果良好,回收率满足测试要求,重现性好,与知名厂商同型号柱性能相当。


二、实验目标物
四种硝基呋喃类代谢物:呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2- 噁唑烷基酮(缩写AMOZ,  CAS:43056-63-9)、呋喃西林代谢物氨基脲(缩写SEM, CAS:563-41-7)、呋喃妥因代谢物1-氨基-2-内酰脲(缩写AHD,CAS:2827-56-7)和呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮(缩写AOZ, AS:80-65-9)。


三、应用范围
本方法适用于动物源性食品包括猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)中硝基呋喃类代谢物残留检测。


四、参考标准
《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》和《农业部1077号公告-2-2008 水产品中硝基呋喃代谢物残留量的测定》。


五、实验材料
Biocomma®Copure® HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360);W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。


六、实验方法
1、样品待测溶液制备
(1)样品称取脱脂
称取待测样品2 g(精确到0.01 g),置于50 mL离心管中加入10 mL甲醇-水混合物(2:1),振荡混匀10 min,4000 r/min离心10 min,吸取清液弃掉、离心管中试样备用。

(2)水解衍生化

向上述离心管中加入20 mL0.2 mol/L盐酸,振荡混匀10 min,后加入0.4 mL 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛(0.075 g2-硝基苯甲醛溶于10 mL 二甲亚砜),涡旋混匀1 min,置于37 ℃恒温振荡器水浴中避光反应16h。将上述衍生液,放置至室温,加入5 mL0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液,用1 mol/L NaOH调节pH到约7.4,4000 r/min离心10 min,上清液(对脂肪含量多的试样,可加入5 mL正己烷,振荡2 min,4000 r/min离心5 min吸取并弃掉正己烷)待净化。


2、SPE柱净化
(1)活化:依次用5 mL甲醇、10 mL水活化。
(2)上样和洗脱:取上述备用液控制流速小于2 mL/min过柱。待样液全部通过后用10 mL水淋洗上样柱,弃去全部流出液并真空抽干,用5 mL乙酸乙酯洗脱柱子上的待测成分。
(3)重新溶解:收集洗脱液,于40 ℃氮气吹干,准确加入1 mL 乙腈/水(1:2, v/v)溶液溶解残余物混匀,0.22 µm滤膜过滤,供高效液相色谱测定。


3、HPLC条件
设备:Waters Alliance 2690
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm,5 µm)
检测器:Waters 2487 双波长检测器;检测波长:275nm
流动相:A:乙腈   
B:0.01mol/L乙酸铵(0.77g乙酸铵,1000 mL水溶解,甲酸调pH 3.5 )
洗脱方式:梯度洗脱

 

表1 洗脱梯度条件


柱温:30 ℃
流速:1.0 mL/min
进样量:20 µL


七、实验结果
1、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果
表2 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果



表3 W品牌同型号柱,添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的添加回收结果



2、添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的紫外检测色谱图
图1  添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中四种硝基呋喃代谢物衍生物的紫外检测色谱图

 

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